荧光定量PCR（Real-time PCR）是一种先进的技术，通过在PCR扩增反应体系中添加荧光基团，实时检测扩增反应中每个循环的荧光信号，最终借助标准曲线对未知模板进行定量分析。例如，在探针法的荧光定量PCR中，PCR扩增时同时加入一对引物和一个特异性的荧光探针，该探针两端分别带有报告荧光基团和淬灭荧光基团。起初，探针完整地结合在DNA单链上，报告基团发出的荧光信号被淬灭基团吸收，因此无法检测到荧光信号；随着PCR扩增的进行，Taq酶对探针进行降解，使得报告荧光基团与淬灭荧光基团分离，这样每增加一条DNA链，就会形成一个荧光分子，从而实现荧光信号的累积，与PCR产物的形成完全同步。

与传统PCR检测方法相比，实时定量PCR技术具有诸多优势，它无需染色处理和电泳分离，并且能够准确进行定量分析，避免假阳性污染问题，极大地扩展了其应用范围。实时定量PCR在扩增反应的初始几循环中，其荧光信号变化微小，形成一条近似直线的基线。随着反应进入指数增长期，荧光扩增曲线表现出高重复性，此时可以设定荧光阈值线，通常设定为3-15个循环的标准偏差的10倍。每个反应管内荧光信号达到设定阈值时经过的循环数称为CT值，该值与起始浓度的对数之间呈线性关系。

CT值的主要用途在于计算目标基因的表达量，涵盖绝对定量和相对定量两个概念。绝对定量旨在测定目标基因在样本中的分子数量，通常为拷贝数；而相对定量则测定目标基因在两个或多个样本中的相对含量, 无需深入了解每个样本的拷贝数。尽管CT值可用于计算这两种定量结果，但绝对定量需使用已知拷贝数的标准品并进行标准曲线绘制，而相对定量则可选择是否使用标准曲线。

自荧光定量PCR问世以来，其在生物医学领域产生了深远影响。其主要应用领域包括：

1. 核酸定量分析

用于传染病的定量和定性分析，检测病原体和病毒含量，例如甲型H1N1流感、转基因动物与植物基因拷贝数以及RNAi基因失活率等。

2. 基因表达差异分析

对不同处理样本间特定基因的表达差异进行比较，如药物、物理及化学处理造成的影响，以及cDNA芯片或差异显著性分析的验证。

3. SNP检测

单核苷酸多态性检测在探索个体对不同疾病的易感性和药物反应的研究中具有重大意义，一旦SNP序列已知，通过该技术进行高通量检测将变得简便准确。

4. 甲基化检测

与多种人类疾病特别是癌症相关的甲基化检测，采用Methylight技术，可高效区分甲基化与非甲基化DNA。

5. 产前诊断

通过非创伤方式从孕妇外周血中分离胎儿DNA，实时荧光定量PCR检测Y性别决定区基因，有效减少遗传性疾病儿童的出生。

6. 病原体检测

荧光定量PCR技术能够对多种病原体（如淋球菌、沙眼衣原体等）进行高灵敏度的定量检测，优于传统检测方法。

7. 药物疗效考核

对乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒的定量分析显示病毒量与药物疗效间的关联，有助于监控治疗效果。

8. 肿瘤基因检测

实时荧光定量PCR能够有效检测癌基因突变和表达量，是肿瘤早期诊断的重要工具。

总之，荧光定量PCR在生物医学领域的广泛应用，尤其在疾病诊断、基因表达研究等方面，展现出其重要的科研和临床价值。尊龙凯时致力于为大家提供最前沿的生物医疗技术，推动科学研究的发展。