酶联免疫吸附测定（ELISA）是一种用于定性和定量检测可溶性抗原或抗体的免疫诊断方法。该技术通过将抗原或抗体结合到聚苯等固相载体上，利用抗原与抗体的特异性结合，达到检测血清、尿液及细胞培养上清液中目标分子的目的。

ELISA的基本原理是在固相载体表面吸附已知的抗原或抗体，并利用与之结合的酶标记抗原或抗体进行反应。操作步骤包括设置标准孔、空白孔和样本孔。在标准孔中加入100μL稀释标准品，空白孔中加入相应的标准品和样本稀释液，其他孔中加入待测样本。建议进行复孔设置，并通过预实验或技术支持确定待测样本的稀释倍数。同时，应在37℃下孵育90分钟，操作时注意尽量减少气泡产生。

洗涤步骤为每孔加入350μL洗涤液，浸泡1分钟后吸去液体，并重复此步骤3次以确保充分清洗。洗完后需立即进行下一个步骤，不要让微孔板干燥。接下来，向每孔中添加HRP酶结合物工作液，并在37℃下温育30分钟。清洗后，加入底物溶液（TMB），在37℃避光孵育约15分钟，直到标准孔显示出明显的蓝色梯度后再终止反应。

最后，使用酶标仪在450nm波长下测量每孔的光密度（OD值）。需要说明的是，由于实验环境的差异，标准曲线的OD值可能存在不同，实验室过去建立过的标准曲线数据仅供参考。

在样本处理方面，血清、血浆或其他液体样本通常以100μL的体积检测一个指标。在未经过分离处理的情况下，1毫升全血可分离出约100-200μL的血清，需按照客户实际样本情况进行操作。全血样本应在4℃下保存并送检，其余液体样本需在-20℃下冷冻保存送检。而组织样本需至少0.1g（约黄豆大小），最终可提取500μL上下清液用于检测5个指标，样本同样在-20℃下冷冻保存。

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