细胞的复苏成败与冻存及复苏操作密切相关。上周我们讨论了细胞冻存中常见的错误，深入剖析了《细胞复苏失败原因分析——冻存篇》。本篇文章将从复苏的角度出发，排查复苏过程中常见的问题。

复苏步骤回顾

在进行细胞复苏之前，让我们先回顾一下具体步骤：

1. 提前将水浴锅预热至37℃，培养基复温，离心机设置好转速。
2. 准备一个15ml的离心管，加入适量的培养基。
3. 取出冻存管，迅速将其浸入水浴锅中并轻轻摇晃，以确保在2分钟内细胞完全融化。
4. 将细胞悬液缓慢滴入提前加了培养基的离心管中，设置1000rpm离心3分钟。
5. 弃去上清，重悬细胞并接种至培养皿中，置入培养箱中。

复苏常见的错误操作

以下是细胞复苏中常见的错误操作：

1. 运输问题：如果液氮或冰箱与水浴锅的距离较远，且未采取保冷措施，细胞在运输过程中可能会开始融化（尤其是在夏季），因此冻存细胞应放在干冰或冰盒上运送。
2. 手部接触：运输冻存管时，请避免用手直接触碰细胞部分或将其放在口袋中。正确的做法是捏住管盖或将其放在容器中运输，以避免局部温度升高。
3. 融化方式：切勿用手捂热冻存管（如搓热），这样会导致细胞受热不均且降温速度过慢，增加细胞死亡的风险。
4. 水浴控制：在水浴过程中，请严格控制时间，确保在水中摇晃以促进细胞熔化。遵循“快融”原则，建议在2分钟内将细胞充分融化。
5. 冰块残留：若水浴结束时管内仍有冰块未融化，可能会导致细胞死亡。应尽量确保冰块完全融化，防止温度不均导致的细胞损伤。
6. DMSO去除：细胞融化后应进行离心以去除DMSO。虽然有些细胞可以在不离心的情况下直接培养，但DMSO对某些细胞（如HL-60）有较高毒性，因此建议离心以确保细胞安全。

以上总结基于小尚多年的经验，结合冻存篇的内容，基本上可以解决复苏失败的所有问题。如果您还有其他未提及的知识点，欢迎在评论区补充！同时，想要获取更多生物医疗相关的信息，确保关注尊龙凯时。我们将继续为您提供优质内容！